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ELISA酶聯(lián)吸附試驗(yàn)內(nèi)源性物質(zhì)有哪些?

日期:2025-04-03 17:06
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摘要: ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)即酶聯(lián)吸附試驗(yàn),是一種常用的固相酶免 疫測(cè)定方法。有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果。常見(jiàn)的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異 性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。 (1)類風(fēng)濕因子 人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕捉抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②...

ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)即酶聯(lián)吸附試驗(yàn),是一種常用的固相酶免 疫測(cè)定方法。有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果。常見(jiàn)的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異 性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

1)類風(fēng)濕因子

人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕捉抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效);③檢測(cè)抗原時(shí),可以用2-巰基yi 醇等加入到標(biāo)本 稀釋液中,使RF降解。

2)補(bǔ)體

ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過(guò)程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái),使C1q 可以將二者連接起來(lái),從而造成假陽(yáng)性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標(biāo)本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。

3)嗜異性抗體

人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig ( s ) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái),也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng) 物Ig ( s ) ,但加入量不足或亞類不同時(shí)無(wú)效。

4)嗜靶抗原的自身抗體

抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn),解決的辦法是:測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。

5)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體

臨床開(kāi)展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治 療,用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治 療等新技術(shù),均有可能使這些病人體 內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig ( s )抗體。這些病人ELISA測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。解決的辦法是:測(cè)定抗原時(shí),在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig ( s ) ,從而克服由于上述原因造成的假陽(yáng)性。

6)交叉反應(yīng)物質(zhì)

di高辛、類AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大,但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí) ,假如交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí),也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

7)標(biāo)本中其它成分的影響

血清脂質(zhì)過(guò)高、膽紅素、血紅蛋白及粘度過(guò)大等,均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用。

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